免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常需要將抗體標(biāo)記上酶或者熒光素，大部分科研工作者一提到FITC熒光標(biāo)記抗體往往會(huì)很畏懼，主要原因是不知道如何下手，參照一些文獻(xiàn)的方法和步驟做出來的結(jié)果往往不盡如人意，往往讓實(shí)驗(yàn)人員畏而束手。其實(shí)，抗體的標(biāo)記確實(shí)有一些麻煩和一些小技巧，但不是太神秘的事情。

　　

　　一、你需要了解你現(xiàn)在所需要的標(biāo)記物的特性，選擇合適的帶活性標(biāo)記物（HRP酶，生物素或者熒光染料），對(duì)活性的標(biāo)記物要清楚其溶解性(脂溶性還是水溶性)、保存要求、活性位點(diǎn)化學(xué)反應(yīng)特性等等。

　　

　　有些熒光染料有較為苛刻的要求，一定要防潮，一旦遇到水活性鍵在幾分鐘內(nèi)或幾小時(shí)內(nèi)*失活。在保存FITC熒光標(biāo)記抗體時(shí)都要求避光，使用和反應(yīng)過程都要盡量避光。活性染料的活性鍵與抗體的反應(yīng)基團(tuán)必須要清楚，這樣才能保證給其提供適宜的反應(yīng)條件。

　　

　　二、FITC熒光標(biāo)記抗體的純度要好，特異性和溶解性也要好，盡量不要有變性抗體和沉淀物。其溶解的溶液環(huán)境以無機(jī)鹽(比如PBS環(huán)境)為佳，處于一個(gè)合適穩(wěn)定的PH值環(huán)境，溶液中不含有游離的可干擾反應(yīng)的物質(zhì)，比如，大部分的活性染料是與抗體的伯氨基（-NH2）反應(yīng)，所以溶液中一定不能含有帶伯氨基的化學(xué)物質(zhì)(比如游離的氨基酸，游離肽之類的)。

　　

　　我們純化抗體過程需要大量使用這些試劑，在后期往往沒有去除干凈。加個(gè)標(biāo)準(zhǔn)參照，一些非活性的染料都可以作為參照指示劑，實(shí)在找不到合適的染料，加點(diǎn)藍(lán)墨水也可以，一般來說如果可以準(zhǔn)確計(jì)算，顏料的摩爾數(shù)是預(yù)除去小分子的20倍為宜，透析或者超濾到看不到顏色，這個(gè)基本上可以保證您對(duì)游離小分子去除干凈。

　　

　　三、標(biāo)記反應(yīng)過程，標(biāo)記反應(yīng)的條件要是適合于標(biāo)記物化學(xué)反應(yīng)的，而于此同時(shí)又不能損傷FITC熒光標(biāo)記抗體的活性。對(duì)于標(biāo)記緩沖液中同樣不能有游離基團(tuán)或者抑制劑干擾反應(yīng)；標(biāo)記溫度和時(shí)長(zhǎng)也要合理控制；標(biāo)記物與抗體的比例要合適，不是越多越好。整個(gè)標(biāo)記反應(yīng)過程要避光，所使用接觸的所有的容器槍頭一定要干凈。

　　

　　四、標(biāo)記反應(yīng)完之后，殘留的未標(biāo)記的標(biāo)記物、有機(jī)溶劑一定要去除干凈（去除干凈的標(biāo)準(zhǔn)同抗體溶液環(huán)境中游離干擾物去除方法），同時(shí)，PH要調(diào)整到FITC熒光標(biāo)記抗體適合的環(huán)境。必要的時(shí)候加入30&左右甘油和保護(hù)性的蛋白，分裝成小份-20℃保存。