WB實驗的步驟較多，耗時均較長，且每步都影響其結(jié)果表現(xiàn)。我們將常見問題總結(jié)歸納，下面將對各問題進行分類總結(jié)，并對出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因進行分析，給出相應(yīng)的解決辦法。

　　

　　無信號，沒有陽性條帶

　　

　　WB實驗結(jié)果中常出現(xiàn)白板或者條帶無信號響應(yīng)現(xiàn)象，我們針對出現(xiàn)該現(xiàn)象可能的原因主要從抗體，抗原，實驗操作和緩沖液幾方面進行分析。

　　

　　1、抗體相關(guān)原因：

　　

　　WB中所用到抗體包括一抗和二抗，在該問題上，兩個抗體方面可能存在的原因以及相對應(yīng)的解決方法。

　　

　　解決辦法：二抗選用不恰當，選擇與一抗相匹配的二抗類型，二抗需和一抗宿主的物種相同。無足夠量抗體結(jié)合目標蛋白，降低一抗稀釋度；使用效價高的一抗；延長抗體孵育時間;膜充分浸潤在液體中。

　　

　　2、抗原相關(guān)原因

　　

　　抗原即所需要檢測目的蛋白，其相關(guān)原因可能是未被一抗識別或者是抗原量不足引起。

　　

　　解決辦法：一抗不識別待檢測的目的蛋白，參照數(shù)據(jù)庫對比抗原序列和蛋白序列，選擇合適一抗，確保會發(fā)生特異性反應(yīng)，抗原量不足或降解，每條泳道上樣量不低于20~30ug，使用蛋白酶抑制劑并設(shè)置陽性對照。

　　

　　實驗操作規(guī)范對于實驗結(jié)果也至關(guān)重要，且需要重復摸索。無條帶出現(xiàn)可能是目標蛋白未從膠轉(zhuǎn)移至膜上或者洗膜過度。

　　

　　WB實驗結(jié)果中可能出現(xiàn)有目標蛋白條帶，但是目標條帶在膜上顏色較淺。該現(xiàn)象原因與無目標條帶較為相似，可能導致該現(xiàn)象的原因我們也從4個方面進行分析，并給出相應(yīng)的解決方法。