蛋白Marker試劑是生物學(xué)常用的試劑之一，不僅可以用于直觀地監(jiān)測(cè)SDS-PAGE電泳的進(jìn)程，評(píng)估PVDF、尼龍和硝酸纖維素膜的轉(zhuǎn)移效率、還可以用于計(jì)量蛋白質(zhì)的大致分子量。
為何有時(shí)有些條帶會(huì)消失不見(jiàn)？或Marker蛋白高分子量跑著跑著不見(jiàn)了？
可以從以下幾方面查找原因：
1、很有可能是蛋白Marker遭到蛋白酶污染而造成降解：可能是跑膠緩沖液遭受蛋白酶（proteinase）污染，或是buffer重復(fù)使用太多次，導(dǎo)致長(zhǎng)菌以致于有蛋白酶存在，或是上樣時(shí)反復(fù)使用同一支Tip。
解決辦法：
?。?）上樣時(shí)避免反復(fù)使用同一支Tip。
?。?）內(nèi)槽使用新鮮配置的跑膠緩沖液。
?。?）如前面建議，如果實(shí)驗(yàn)室太多人同時(shí)使用一管蛋白Marker試劑，因?yàn)槊總€(gè)人的使用習(xí)慣無(wú)法控制，建議可以先分成小管，就不會(huì)一次污染一整管造成浪費(fèi)。
2、檢查所用凝膠的類型/百分比，凝膠濃度過(guò)低可能會(huì)導(dǎo)致小分子量條帶不能很好分散；反之，則可能會(huì)導(dǎo)致高分子量條帶不好分散。
凝膠電泳體系的影響排查：如需要排查是Marker的原因還是電泳體系的影響，建議可以在同一塊膠上進(jìn)行對(duì)比測(cè)試，在同一塊膠上電泳疑似問(wèn)題產(chǎn)品和正常產(chǎn)品，看條帶是否有差異，以排除凝膠電泳系統(tǒng)的影響。
3、檢查蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的有效期，過(guò)期產(chǎn)品可能出現(xiàn)褪色或缺失條帶。
4、檢查蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)存條件，儲(chǔ)存條件不當(dāng)也會(huì)影響標(biāo)準(zhǔn)品中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
5、確保蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品在裝入凝膠前未加熱/煮沸，該款蛋白Marker試劑為即用型，加熱/煮沸可能會(huì)導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品中的蛋白質(zhì)降解。
6、如遇膠上有、而轉(zhuǎn)膜后消失的話，請(qǐng)檢查轉(zhuǎn)膜后濾紙上是否有相應(yīng)Marker條帶并調(diào)整轉(zhuǎn)印條件。
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更新時(shí)間：2023-03-13
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