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ELISA相關(guān)問題(三)

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13. Q:變異系數(shù)(CV)較大的原因?

A

可能原因參考解決方案
孔中有氣泡加樣小心,避免讀數(shù)前產(chǎn)生氣泡
孔板洗滌不均/不充分確保每次洗滌達(dá)到要求,按建議洗滌
試劑混合不充分確保試劑已充分混合
加樣量不一樣使用校準(zhǔn)好的移液器確保每孔加樣量一致
邊緣效應(yīng)試劑盒提前恢復(fù)室溫,保證所有試劑溫度一致
樣品制備/保存不一致確保始終如一的樣品,避免不同批次/保存條件造成的差異

14. Q:標(biāo)準(zhǔn)曲線較差?

A

可能原因參考解決方案
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不當(dāng)確認(rèn)是否正確稀釋
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶前短暫離心,確保是否充分溶解
標(biāo)準(zhǔn)品降解確認(rèn)保存方式及存放時(shí)間
曲線和標(biāo)度不適合嘗試不同的擬合方式
邊緣效應(yīng)試劑盒提前恢復(fù)室溫,保證所有試劑溫度一致
移液出錯(cuò)使用校準(zhǔn)好的移液器和正確的移液方法
標(biāo)準(zhǔn)品有污染小心操作,避免污染
錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說(shuō)明書的流程中操作

15. Q:高背景或陰性對(duì)照值偏高

A

可能原因參考解決方案
洗板不充分將洗滌液注入反應(yīng)孔充分洗滌,充分拍干孔中液體
酶結(jié)合物過(guò)量檢查酶稀釋度,按說(shuō)明書標(biāo)識(shí)的稀釋度稀釋
底物污染加底物前檢查底物是否為透明無(wú)色,請(qǐng)勿用變藍(lán)的底物,重新用新的底物試驗(yàn)
陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照污染注意洗滌時(shí)不要把洗液溢出孔外,不使陰陽(yáng)對(duì)照孔液體漣接一起
不同批次試劑混用檢查試劑批號(hào),請(qǐng)勿用不同批次試劑
終止后太長(zhǎng)時(shí)間讀數(shù)終止后應(yīng)立即讀數(shù)

16. Q:顯色信號(hào)弱

A

可能原因參考解決方案
試劑過(guò)期檢查試劑盒有效期,請(qǐng)勿用過(guò)期試劑
孵育時(shí)間過(guò)短按說(shuō)明書中規(guī)定的時(shí)間孵育
試劑污染檢查試劑是否污染,請(qǐng)勿用污染的試劑
酶標(biāo)儀濾光片不匹配檢查酶標(biāo)儀設(shè)置及濾光片是否匹配
試劑盒平衡不充分確保試劑盒試驗(yàn)前平衡至室溫
顯色時(shí)間不夠增加底物顯色時(shí)間

17. Q:無(wú)顯色信號(hào)

A

可能原因參考解決方案
檢測(cè)抗體、酶、或顯色劑漏加檢查試驗(yàn)操作流程,重復(fù)試驗(yàn)
酶被疊氮鈉污染請(qǐng)使用重新配制的試劑
試劑添加順序有誤檢查復(fù)核試驗(yàn)添加順序、流程,重復(fù)試驗(yàn)
波長(zhǎng)不正確核實(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)

18. Q:標(biāo)曲佳但樣品孔無(wú)信號(hào)

A

可能原因參考解決方案
樣品中靶標(biāo)物含量低或樣品中無(wú)靶標(biāo)物設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,重復(fù)實(shí)驗(yàn)
樣品基質(zhì)效應(yīng)影響檢測(cè)重新稀釋樣品后復(fù)測(cè)
標(biāo)曲選擇不合適更換擬合方式,選最合適的擬合方式
樣本含量低于靈敏度濃縮樣本或更換靈敏度更高的試劑盒


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