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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章黃曲霉毒素B1ELISA試劑盒的樣本前處理步驟

黃曲霉毒素B1ELISA試劑盒的樣本前處理步驟

更新時(shí)間:2012-11-13點(diǎn)擊次數(shù):2487

 黃曲霉毒素B1ELISA試劑盒

樣本前處理步驟

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:配制60 %甲醇水溶液(v/v,60:40)和20 %甲醇水溶液(v/v,20:80)。
注意:請(qǐng)配制上述溶液,以免影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
1 . 脂肪含量低的固體樣品(如大米、玉米、小麥和飼料等)
1、稱取5 g 粉碎樣品于100 mL帶塞三角瓶?jī)?nèi),準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液。
2、將加入了甲醇水溶液的樣品放入振蕩器內(nèi)(或用手強(qiáng)力振蕩),充分振蕩3 min后,用濾紙過(guò)濾,收集濾液。
3、取濾液2 mL,加入6 mL 20 %甲醇水溶液,混勻,用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾,此為樣品待檢液。
2.醬油、醋
1、稱取5 g樣品于25 mL小燒杯中,用10 mL蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移到125 mL分液漏斗中,加入25 mL三氯甲烷,加塞輕輕振搖3 min,靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層,取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中,65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后,準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液,將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL,加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,此為樣品待檢液。
3.食用油(如菜油、麻油、色拉油、花生油等)
1、稱5 g油樣于25 mL小燒杯中,用20 mL石油醚或正乙烷分次將試樣轉(zhuǎn)移125 mL分液漏斗中,準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液,加塞輕輕振搖5 min,靜置分層,放出下層60%甲醇水提取液。
2、取提取液2 mL,再加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,此為樣品待檢液。
4.酒類
1、稱取5 g樣品于125 mL分液漏斗中,加入25 mL三氯甲烷,加塞輕輕振搖3 min,靜置分層。
2、放出下層三氯甲烷層,取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中,65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后,準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液,將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL,再加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,此為樣品待檢液。
5.花生
1、樣品去殼粉碎,稱取5 g于100 mL具塞三角瓶中。加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷(或石油醚),振搖10 min,用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾。
2、收集濾液于125 mL分液漏斗中,靜置分層后放出下層60%甲醇水提取液。
3、取提取液2 mL,再加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,再用whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾,此為樣品待檢液。
6.月餅、桃酥、花生醬等
1、稱取5 g粉碎樣品于125 mL具塞三角瓶中,準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液和20 mL正乙烷(或石油醚)加塞震蕩10 min,過(guò)濾,收集濾液于分液漏斗中,靜置分層。
2、待下層甲醇水溶液澄清后,放出甲醇水溶液于另一三角瓶中。吸取10 mL甲醇水提取液于125 mL分液漏斗中,加入20 mL三氯甲烷,加塞輕輕振搖3 min,靜置分層。放出下層三氯甲烷層,取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中,65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后,準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液,將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL,再加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,此為樣品待檢液。
7.面粉、飼料濃縮料
1、稱取5 g樣品于125 mL具塞三角瓶中,準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液加塞震蕩10 min,過(guò)濾,收集濾液。
2、吸取10 mL濾液于125 mL分液漏斗中,加入20 mL三氯甲烷,加塞振搖3 min,靜置分層。放出下層,取10 mL于20 mL蒸發(fā)皿中,65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后,準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液,將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
3、取溶解液2 mL,再加入6 mL 20%甲醇水溶液,混勻,此為樣品待檢液。
 
注意:
1、某些樣品待檢液(如花生等)久置會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,為保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性,樣品提取后請(qǐng)即時(shí)檢測(cè)。
2、 若樣品待檢液不立即檢測(cè),請(qǐng)將其存儲(chǔ)于棕色玻璃瓶?jī)?nèi),2-8 ℃避光保存。
3、 試劑盒在使用前,請(qǐng)將試劑盒內(nèi)所有試劑放到室內(nèi)溫度(20-25 ℃)進(jìn)行溫度平衡;試劑用完后立即將其放置回2-8 ℃冰箱內(nèi)保存。
4、 在每個(gè)步驟操作時(shí),速度要快,不要將板孔暴露在空氣中時(shí)間過(guò)久,避免酶標(biāo)板變干。未用完的酶標(biāo)板需密閉于自封帶內(nèi),防止受潮且避光保存于2-8 ℃冰箱內(nèi)。
5、 溫育時(shí),需避光,建議將酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)(在有蓋容器內(nèi)放置一塊平整濕紗布)進(jìn)行溫育。

 

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