實驗干貨

液相色譜壓力高了怎么辦

●SOLARBIO

大家有沒有經(jīng)常遇到這類問題呢？只要開展帶基質(zhì)樣本檢測、新產(chǎn)品開發(fā)相關(guān)試驗，液相色譜大批量檢測樣品之后，系統(tǒng)壓力就會慢慢走高，直至觸達(dá)壓力極限，隨之漏液、儀器接連報錯。哪怕樣品前處理已經(jīng)最大限度凈化，仍舊無法杜絕。遇到這種情況不用慌，下面小編結(jié)合實操經(jīng)驗，細(xì)致梳理液相色譜壓力過高的原因以及應(yīng)對方案。

#可怕的高壓力圖

一、壓力升高從哪兒來？

液相系統(tǒng)壓力取決于流速、流動相粘度、管路內(nèi)徑和色譜柱反壓。

但其實做得多了的友友都知道，壓力逐漸升高，問題基本都出在色譜柱身上！很少情況是泵或檢測器的原因~

比如有一次實驗，色譜柱壓力越來越高，我們停下序列，反復(fù)排查，最后拆開色譜柱，發(fā)現(xiàn)入口端篩板處肉眼可見發(fā)生了填料塌陷。

結(jié)合整個前處理以及進(jìn)樣過程，我們分析可能有這么幾種原因：

流動相pH過高

實驗使用的流動相pH達(dá)到了10左右，大概率是這個原因?qū)е绿盍纤?；高pH環(huán)境下，硅膠中的硅氧鍵被氫氧根攻擊斷裂，填料表面甚至內(nèi)部逐漸溶解。柱頭首當(dāng)-其沖，溶解后填料體積收縮、顆粒變小，自然就塌了。

緩沖鹽的析出

因為HPLC檢測方法中流動相有硼-酸鹽體系，有可能是梯度結(jié)束時高比例的有機相沖洗不徹-底，鹽微粒殘留在柱前，逐漸使壓力升高。

樣本里的微粒

雖然過0.22µm濾膜，但樣本里細(xì)微的不溶物、雜質(zhì)等仍然可能緩慢堆積在柱頭篩板上。

強保留的“臟東西"

比如一些脂溶性成分、色素等，慢慢吸附在柱頭，造成原孔徑變小，壓力自然升高。

二、如何系統(tǒng)化排查原因？

根據(jù)以往經(jīng)驗，我們的排查順序大致為以下流程:

1檢查：觀察壓力變化

措施

操作：

觀察壓力是突然飆升還是緩慢爬升

判斷與處理：

• 緩慢爬升 → 多與污染、結(jié)晶有關(guān)

• 瞬間飆升 → 可能是某處突然堵塞

2檢查：斷開色譜柱，接兩通

措施

操作：

斷開色譜柱，用兩通直接連接管路

判斷與處理：

• 壓力仍高 → 問題在泵、進(jìn)樣器或管路
• 壓力驟降 → 問題在色譜柱部分

3檢查：溶劑瓶及吸濾頭

措施

操作：

觀察瓶內(nèi)有無漂浮物或絮狀物，吸濾頭是否有顏色變化

判斷與處理：

堵塞則清洗吸濾頭或直接更換

4檢查：在線脫氣機

措施

操作：

觀察流動相中是否有明顯氣泡流出

判斷與處理：

氣泡多 → 檢查脫氣機真空度或管路，必要時清洗或更換脫氣管

5檢查：在線過濾器/保護(hù)柱

措施

操作：

• 取下濾片，超聲清洗后裝回

• 更換柱芯后壓力恢復(fù)，說明舊柱芯已飽和

判斷與處理：

若壓力下降 → 濾片堵塞/柱芯污染，建議定期清洗濾片或更換柱芯

6檢查：混合器 / 泵密封墊 / 進(jìn)樣針座

措施

操作：

• 混合器內(nèi)置濾芯：更換或超聲
• 泵密封墊：檢查磨損，更換密封墊并清洗泵頭
• 針座：拆下反沖或用熱水超聲

判斷與處理：

逐一排查，哪個處理后壓力下降就是問題源

7 檢查：色譜柱

措施

操作：

斷開色譜柱后，壓力驟降 → 問題在色譜柱部分

判斷與處理：

高比例水低流速沖洗色譜柱；或進(jìn)行反沖（僅限允許反沖的色譜柱）；或更換色譜柱

特別提醒：

高pH流動相使用后若發(fā)生填料塌陷，反沖基本無效，只能更換。

三、儀器保護(hù)+樣本前處理雙管齊下

最-常用的方式是加在線過濾器或保護(hù)柱，有了這種硬件防護(hù)，對色譜柱的保護(hù)效果會好很多。

在線過濾器

可以攔截管路中的磨損碎屑和流動相顆粒，壓力異常時可以超聲清洗濾片，重復(fù)使用；或直接換新濾片（一個濾片也不貴）。

保護(hù)柱

要與分析柱同填料，可吸附強保留雜質(zhì)，柱芯通常不可清洗，只能更換。

除了硬件防護(hù)，樣本前處理同樣關(guān)鍵，具體可以做好以下幾點。

離心+過濾

高速離心，取上清過0.22µm濾膜，這些都是眾所-周知的基本操作啦。

SPE凈化

復(fù)雜的樣本最好加一步 C18 或 HLB 等固相萃取步驟（Solarbio 各種 SPE 小柱等您來選哦）。

溶劑匹配

樣本溶劑比例盡量與初始流動相一致，可以防止進(jìn)樣瞬間析出結(jié)晶。

一點小結(jié) 

壓力升高是“信號"，不是“終點"

很多友友看到壓力高就很焦慮，別焦慮，壓力變化是儀器給出的重要健康信號~通過系統(tǒng)排查、硬件保護(hù)、日常維護(hù)，絕大多數(shù)壓力問題都可以在早期解決。

希望今天的經(jīng)驗?zāi)軒痛蠹疑僮咭恍澛?！也歡迎實驗室同行留言交流遇到的奇葩儀器故障，互相學(xué)習(xí)，總比一個人悶頭琢磨要強得多！