支原體堪稱細(xì)胞培養(yǎng)頭號隱形殺手，個頭僅50-300nm，能輕松鉆過濾膜。初期污染毫無征兆，單純雙抗完-全無法預(yù)防，它的出現(xiàn)極易導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)異常甚至扎堆脫落、同時可能伴隨培養(yǎng)基突然發(fā)黃等異常代謝提醒。除此之外，支原體還會篡改細(xì)胞膜抗原、干擾核酸復(fù)制等，大幅降低轉(zhuǎn)染效率，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)反復(fù)翻車。

不管是科研發(fā)文還是生物醫(yī)藥研發(fā)，支原體檢測都是硬性質(zhì)控門檻，SCI期刊如《Nature》、中國藥典均有明確強(qiáng)制要求。最糟糕的是，不少人甚至因未對細(xì)胞做支原體檢測，論文直接被期刊打回返工。因此，精準(zhǔn)防控并清除支原體，是研發(fā)成功的一大要點。

一、常見支原體四大污染源頭

踩中即翻車

人為操作（頭號元兇）：人體唾液、體表自帶支原體，不規(guī)范戴手套、操作臺消毒不到位、液體飛濺產(chǎn)生氣溶膠，極易引入污染。

原代組織自帶菌：取材組織本身攜帶支原體，分離細(xì)胞直接帶毒。

培養(yǎng)試劑（低風(fēng)險）：血清是主要風(fēng)險點，正規(guī)出廠均經(jīng)過檢測，正品基本避雷。

細(xì)胞交叉?zhèn)魅荆夯煊眉?xì)胞、互借細(xì)胞株，一株污染全實驗室淪陷。

二、4種主流檢測方法

按需pick不踩坑

PCR/qPCR法（常規(guī)實驗室首-選）

靶向支原體16S rRNA片段擴(kuò)增，靈敏度高、特異性強(qiáng)，2-4小時出結(jié)果，新細(xì)胞入庫、血清培養(yǎng)基篩查、期刊投稿配套檢測都靠它。

Hoechst熒光染色法

成本低、上手難度低，若存在污染，細(xì)胞熒光試劑共培養(yǎng)幾日后可在熒光鏡下看見細(xì)胞表面的熒光小點，適合日常快速初篩、課堂實驗；缺點是靈敏度一般。

培養(yǎng)法（金標(biāo)準(zhǔn)）

藥典產(chǎn)品放行、菌種驗證專用；缺點太慢，要等7-21天，急出結(jié)果勿選。

化學(xué)發(fā)光法

僅檢測活菌，速度快、靈敏度拉滿，但需要專用發(fā)光儀，多用于細(xì)胞治療產(chǎn)品緊急放行。

* 為科研服務(wù)

三、細(xì)胞中招別直接丟！

兩套清除方案挽救珍貴細(xì)胞

注意：本法僅針對污染較輕的細(xì)胞類型，污染較重的建議直接丟棄細(xì)胞。

低細(xì)胞毒性，可穿透細(xì)胞內(nèi)部根-除支原體，不用自行調(diào)配濃度，污染不重時，連續(xù)傳代3-6代即可徹-底清除，原代、敏感脆弱細(xì)胞都能用。

四、預(yù)防＞補(bǔ)救！

6條實操守則，把殺手擋在門外

清除治標(biāo)不治本，日常做好這幾點，污染概率直接暴跌80%：

進(jìn)細(xì)胞房配備全套專用防護(hù)服、手套、口罩，杜絕人體攜帶外源菌群。

新細(xì)胞入庫必檢，單獨隔離培養(yǎng)兩周，檢測陰性再放行，凍存保種不可少。

操作全程無菌意識拉滿，液體濺出立刻消毒，一個時間段只處理一種細(xì)胞，耗材一次性使用，試劑分裝不混用。

超凈臺使用前必滅菌，培養(yǎng)箱、水浴鍋規(guī)律消殺勤換滅菌水，必要時可添加專用抑菌劑或清除噴霧。

血清來源要可靠，優(yōu)先選γ射線滅菌款耗材，若需自行滅菌，高壓之后嚴(yán)格烘干再進(jìn)入細(xì)胞房。

至少每3月對大環(huán)境進(jìn)行一次支原體檢測，每次檢測結(jié)果可建立細(xì)胞臺賬，記錄細(xì)胞來源及對應(yīng)細(xì)胞代次，方便溯源污染源。

索萊寶支原體防控產(chǎn)品

全流程適配

支原體防控說到底，就是 “檢測常態(tài)化、清除及時化、預(yù)防日常化"，只要找對方法、選對試劑，就能把這個 “隱形殺手" 拒之門外。索萊寶搭建了 “檢測-清除-預(yù)防" 全鏈條產(chǎn)品體系，適配實驗室各種場景，質(zhì)量有保障，具體產(chǎn)品可參照下表：