細(xì)胞培養(yǎng) CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒

保存 ：4℃密封避光保存，有效期一年。

產(chǎn)品簡介 ：
    Cell Counting Kit-8 簡稱 CCK-8 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名： 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽） 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗

使用說明 ：
一 、 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 （ 測定細(xì)胞具體數(shù)量時）
    1、先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
    2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6 個復(fù)孔。
    3、接種后培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸） ，OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要*，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。 ）
二 、 細(xì)胞活性檢測
    1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100µL/孔） 。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO 2 的條件下） 。
    2、向每孔加入 10µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)） 。
    3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
    4、用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。
    5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三 、 細(xì)胞增值- 毒性檢測
    1、 在 96 孔板中配置 100 µL 的細(xì)胞懸液。 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時 （在 37 ℃， 5% CO2 的條件下） 。
    2、 向培養(yǎng)板加入 10µL 不同濃度的待測物質(zhì)。 在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間 （例如： 6、 12、 24 或 48 小時） 。
    3、向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)） 。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基） ，去掉藥物影響。
    4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
    5、用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
    6、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

活力計算：.
    細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
    A（加藥） ：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
    A（空白） ：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
    A（0 加藥） ：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
    細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

注意事項 ：
    ①建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。
    ②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
    ③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時，貼壁細(xì)胞的小接種量少為 1 ,000 個/孔 (100 µL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 µL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。
    ④如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 檢測靈敏度高。
    ⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

CCK-8法與其它檢測法之間的比較

相關(guān)產(chǎn)品 ：

M1020  MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
P1020  1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M，細(xì)胞培養(yǎng)級
H1020  Hanks，含鈣鎂，含酚紅（HBSS）
H2045  EBSS（不含鈣鎂，不含酚紅 ）
12100  DMEM(H)
S9000  特級胎牛血清
P1400  青鏈霉素混合液(100×)

 相關(guān)文獻(xiàn)：

《Circular RNA hsa_circ_0002024 suppresses cell proliferation, migration, and invasion in bladder cancer by sponging miR-197-3p》 作者:Yongjun Jiang, Tingran Wei, Wei Li, Ruihua Zhang, and Maogang Chen 期刊:American journal of Translational Research 影響因子:3.266 PMID:30972190
《Desferrioxamine-caffeine shows improved efficacy in chelating iron and depleting cancer stem cells》 作者:BinLiab1BrenoPanniaEspósitoc1ShunhaoWangbdJieZhangbdMingXubdShupingZhangeZhihongZhangaSijinLiubd 期刊:Journal of Trace Elements in Medicine and Biology    Pages:232-238 影響因子:3.755 PMID:30732888
《A thermosensitive RGD-modified hydroxybutyl chitosan hydrogel as a 3D scaffold for BMSCs culture on keloid treatment》 作者:CongcongQuaZixianBaobXinZhangaZhiguoWangcJizhenRencZhongzhengZhouaMeipingTianaXiaojieChengaXiguangChenadChaoFeng 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影響因子:3.909 PMID:30529347
《Probiotic Bacillus subtilis CW14 reduces disruption of the epithelial barrier and toxicity of ochratoxin A to Caco-2?cells》 作者:MengxuePengaJiaweiLiuaZhihongLiangabc 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.977 PMID:30763683
《Emodin alleviates cardiac fibrosis by suppressing activation of cardiac fibroblasts via upregulating metastasis associated protein 3》 作者:Dan Xiao,Yue Zhang,Rui Wang,Yujie Fu,Tong Zhou,Hongtao Diao,Zhixia Wang,Yuan Lin,Zhange Li,Lin Wen,Xujuan Kang,Philipp Kopylov,Dmitri Shchekochikhin,Yong Zhang,Baofeng Yang 期刊:Acta Pharmaceutica Sinica B 影響因子:5.808 PMID:
《Methylation?associated silencing of miR?128 promotes the development of esophageal cancer by targeting COX?2 in areas with a high incidence of esophageal cancer》 作者:Jing Jin, Tiantian Guo ,Yongdong Guo, Jianghui Liu, Feng Qu ,Yutong He 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:30535495
《Panaxadiol inhibits synaptic dysfunction in Alzheimer's disease and targets the Fyn protein in APP/PS1 mice and APP-SH-SY5Y cells》 作者:Xicai Liang，Yingjia Yao，YingLin Liang，KongHong he，XiaoYue Shi，Jingxian Yang 期刊:Life Sciences 影響因子:3.448 PMID:30735733
《Kaempferol promotes proliferation, migration and differentiation of MC3T3-E1 cells via up-regulation of microRNA-101》 作者:Yang Wang, Hongyu Chen & Hanyang Zhang 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:30942633
《Myricetin Suppresses the Propagation of Hepatocellular Carcinoma via Down-Regulating Expression of YAP》 作者:Minjing Li , Jinliang Chen, Xiaofei Yu , Sen Xu , Defang Li , Qiusheng Zheng and Yancun Yin 期刊:Cells 影響因子:5.656 PMID:30999669
 

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