大鼠L選擇素（L-Selectin）ELISA試劑盒

背景介紹：

C 反應(yīng)蛋白(C-reactive protein ,CRP)是指在機(jī)體受到感染或組織損傷時(shí)血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)(急性蛋白)。CRP 是一種環(huán)狀五聚體蛋白，其一級(jí)結(jié)構(gòu)包含 5 個(gè)相同的亞單位，亞單位間以非共價(jià)鍵相結(jié)合，每個(gè)亞單位在其表面都含有 CRP 配體結(jié)合位點(diǎn)(與配體的結(jié)合需Ca 參與)，其另一面含有 Clq 及 FcTR 結(jié)合位點(diǎn)。CRP 可以激活補(bǔ)體和加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬而起調(diào)理作用，從而清除入侵機(jī)體的病原微生物和損傷，壞死，凋亡的組織細(xì)胞，在機(jī)體的天然免疫過程中發(fā)揮重要的保護(hù)作用。

檢測原理：

 Solarbio (Solarbio ®)ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗大鼠 CRP 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 CRP 會(huì)與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗大鼠CRP 抗體，該抗體會(huì)與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的大鼠 CRP 發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的大鼠 CRP，則 HRP 會(huì)使無色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色；后，在 λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的大鼠 CRP 濃度與 OD 成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中大鼠CRP 的濃度。

原理圖：

注意事項(xiàng)：※※※

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過期的試劑。

2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。

3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。

4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。

5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容 器。.

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶 蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng) 用移液器小心吹打幾次。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的 試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。

8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時(shí)請(qǐng)帶上手套并注意防護(hù)；在操 作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請(qǐng)用大量清水清洗；檢測血液樣本 及其它體液樣本時(shí)，請(qǐng)按國家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

試劑盒組成及儲(chǔ)存：

大鼠L選擇素（L-Selectin）ELISA試劑盒

自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購）

1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板機(jī)或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 雙蒸水，去離子水，量筒等

6． 稀釋用聚丙烯試管