L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯脫氫酶
（Gal LDH）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC1255
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入16 mL蒸餾水，充分溶解；

2. 試劑二：臨用前加入2 mL蒸餾水，充分溶解。

產(chǎn)品說(shuō)明：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內(nèi)膜，負(fù)責(zé)催化植物體內(nèi)AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關(guān)鍵酶之一，對(duì)植物體內(nèi)AsA含量的積累起著至關(guān)重要的作用。
Gal LDH催化L-半乳糖內(nèi)酯還原氧化型細(xì)胞*C(Cyt c)，還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測(cè)定還原型Cyt c增加速率，來(lái)計(jì)算Gal LDH活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1、在測(cè)定酶活時(shí)要注意溫度。建議取小燒杯一只裝入一定量的25℃蒸餾水，將此燒杯放入25℃水浴鍋中，在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中；若使用96孔板，反應(yīng)期間應(yīng)放入25℃培養(yǎng)箱中。
2、建議兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、加入最后一種試劑后需迅速混勻并測(cè)定OD值。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g土豆加入1mL提取液冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min，取上清液置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用微量比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A4-A3=0.9253-0.7844=0.1409，ΔA空白管=A2-A1=0，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：Gal LDH（U/g 質(zhì)量）=0.289×(ΔA測(cè)定管-ΔA空白管) ÷W=0.4072 U/g 質(zhì)量。

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