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專注于生物學試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC1130-50T/48S
更新時間：2024-04-24
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：2001
010-50973130
產(chǎn)品分類
相關(guān)文章
NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC1130
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前加入20 mL提取液充分溶解備用；
試劑三：臨用前每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：用時每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用；
工作液：在15 mL試劑二中加入2 mL試劑三和1 mL試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產(chǎn)生*酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
實驗實例：
取0.1g肝加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.929-0.665=0.264，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
NAD-ME（U/g 質(zhì)量）=965×ΔA÷W=965×0.264÷0.1=2547.6 U/g 質(zhì)量。
參考文獻：
Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.
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