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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法輔酶Ⅱ系列BC0400-50T/48S胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 輔酶

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 輔酶
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱(chēng)
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 輔酶
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱(chēng)
Isocitrate Dehydrogenase Cytoplasmic(ICDHc) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號(hào):BC0400-50T/48S

更新時(shí)間:2024-04-24

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪 問(wèn) 量 :1921

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產(chǎn)品介紹

胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒


胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
貨號(hào):BC0400
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件
提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一粉劑×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×2支2-8℃保存
試劑三粉劑×2支2-8℃保存

溶液的配制:

  1. 試劑一:用時(shí)加入50 mL提取液溶解;

  2. 試劑二:用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用;

  3. 試劑三:用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用;

  4. 工作液配制:將試劑一、試劑二、試劑三按85:1:1的比例混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來(lái)源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340nm下測(cè)定NADPH濃度的增加,即可反映ICDHc活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
“具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項(xiàng):
1、若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋?zhuān)?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif;">A2-A1小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋。
2、實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活;工作液37℃水浴放置。
3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4、最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

  1. 取0.1g稗草,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g 4℃離心10min,取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.240-0.224=0.016,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

ICDHc活性(U/g 質(zhì)量)=1608×ΔA÷W=257.28 U/g 質(zhì)量。

  1. 取0.1g小鼠肺部組織,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g 4℃離心10min,取上清稀釋5倍,之后按照測(cè)定步驟操作,測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.253-0.141=0.112,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

ICDHc活性(U/g 質(zhì)量)=1608×ΔA÷W×5=9004.8 U/g 質(zhì)量。

  1. 取小鼠血清樣本直接檢測(cè),測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.225-0.2=0.025,按血清計(jì)算得:

ICDHc活性(U/mL)=1608×ΔA=40.2 U/mL。
參考文獻(xiàn):

  1. Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.

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