儲存條件
-20℃
中文名稱
α-酮戊二酸脫氫酶活性測定試劑盒三羧酸循
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
α-Ketoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC0710-50T/48S

更新時間：2024-04-24

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：2072

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0710
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體0.6 mL×1支	-20℃保存
試劑三	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體1.2 mL×1支	2-8℃保存
試劑五	粉劑×2支	2-8℃保存
試劑六	粉劑×2支	-20℃保存
試劑七	粉劑×2支	-20℃保存
試劑八	粉劑×2支	-20℃保存

溶液的配制：

試劑二：為易揮發(fā)試劑，用完后盡快密封，-20℃保存；
試劑五：臨用前取1支試劑五，加入1 mL試劑三，充分溶解，可2-8℃保存4周；
試劑六：提供一個5 mL試劑瓶，臨用前取1支試劑六，加入3 mL試劑三，充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；
試劑七：臨用前取1支試劑七加入1.5 mL試劑三充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；
試劑八：臨用前取1支試劑八，加入1 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；
工作液的配制：臨用前依次取22 mL試劑三、0.5 mL試劑四、1 mL試劑五、2.75 mL試劑六、1.25 mL試劑七（共27.5mL，約27T），充分混合待用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔*A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD⁺和輔*A生成琥珀酰輔*A、二氧化碳和NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：“具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件"

注意事項：

測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放

入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
測定管的ΔA值在0.01-0.25之間，若測定管的ΔA值大于0.25，需將樣本進(jìn)行稀釋。
由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

取0.1g稗草進(jìn)行樣本處理，將取上清稀釋2倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A4-A3=0.323-0.312=0.011，ΔA空白=A2-A1=0，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

α-KGDH活性（U/g 質(zhì)量）=1488.5×(ΔA測定-ΔA空白)÷W×2（稀釋倍數(shù)）=327.47 U/g 質(zhì)量。

取0.1g小鼠肝臟進(jìn)行樣本處理，4℃ 11000g離心10min，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A4-A3=1.2-0.957=0.243，ΔA空白=A2-A1=0，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

α-KGDH活性（U/g 質(zhì)量）=1488.5×(ΔA測定-ΔA空白)÷W=3617.055 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

Jianyun Yue,Changjian Du,Jing Ji,et al. Inhibition of α-ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in poplar via changes in GABA shunt. Planta. July 2018;(IF3.06)
Xiao Li,Qi Zhao,Jianni Qi,et al. lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma. International Journal of Oncology. May 2018; (IF3.571)

參考文獻(xiàn)：

Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Quantitative α-ketoglutarate dehydrogenase activity staining in brain sections and in cultured cells[J]. Analytical biochemistry, 2000, 277(1): 86-93.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2150/BC2155 檸檬酸（CA）含量檢測試劑盒
BC0950/BC0955 琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒
BC0380/BC0385 *酸脫氫酶（PDH）活性檢測試劑盒
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