北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC5750-50T/48S
更新時間：2024-04-23
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1657
010-50973130
產(chǎn)品分類
相關(guān)文章
細(xì)胞銅（Cu）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5750
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體45 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑一：若有試劑析出，置于37℃水浴溶解即可。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mmol/L（即10000nmol/mL）硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液。
3. 20nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品配制：將10000nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水先稀釋為200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將200nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液稀釋為20nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液備用，具體稀釋可參考以下：取20µL 10000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液加入980µL蒸餾水混勻，即為200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品；再吸取100µL 200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液加入900µL蒸餾水混勻，即為20nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。
產(chǎn)品說明：
銅（Cu）是人體必需的微量元素之一，也是蛋白質(zhì)以及酶的重要組成部分。可以存在于紅細(xì)胞的內(nèi)外，主要功能是輔助造血，即催化血紅蛋白的合成。銅元素可以適當(dāng)促進(jìn)人體的骨骼發(fā)育，促進(jìn)人體神經(jīng)系統(tǒng)以及腦部發(fā)育，維持嬰幼兒的正常生長發(fā)育，因此，測定組織內(nèi)銅離子含量可知體內(nèi)是否缺銅。
酸性條件下，Cu2+從銅藍(lán)蛋白和清蛋白中解離出來，與絡(luò)合劑3,5-二溴-PAESA反應(yīng)，產(chǎn)生紫色絡(luò)合物，在580nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)吸光度與濃度成正比，從而計算出Cu2+濃度。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
細(xì)胞的處理：收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（106個）：蒸餾水體積（mL）為5~10：0.4的比例（建議5百萬細(xì)胞加入0.4mL蒸餾水），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔7s，共3min），然后10000g，4℃，離心10min，取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至580nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 實驗前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預(yù)熱10min。
3、 操作表：（在1.5mLEP管中依次加入以下試劑）
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
蒸餾水 | 250 | - | - |
樣本 | - | 250 | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | 250 |
試劑一 | 550 | 550 | 550 |
試劑二 | 250 | 250 | 250 |
充分混勻，37℃孵育5min，取反應(yīng)液于1mL玻璃比色皿中，立即測定580nm處吸光值A，記為A空白、A測定、A標(biāo)準(zhǔn)，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。 | |||
三、細(xì)胞銅（Cu）含量的計算
1. 按細(xì)胞數(shù)量計算
細(xì)胞銅（Cu）含量（nmol/106 cell）= ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷N =8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
2. 按蛋白濃度計算：
細(xì)胞銅（Cu）含量（nmol/mg prot）= ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷（Cpr×V提?。?/span>
= 20×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，20nmol/mL；V提?。?/span>試劑一體積，0.4mL；N：細(xì)胞總數(shù)，以百萬計；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項：
1. 37℃孵育5min后請立即測定吸光度，若樣本數(shù)量過多，可分批次測定，盡量確保在20min內(nèi)完成測定。
2. 如果樣本測定吸光值大于0.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測定，注意同步修改計算公式。
3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可適當(dāng)增大樣本量，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
實驗實例：
1. 收集約5百萬SHSY5Y細(xì)胞，加入0.4mL蒸餾水，超聲波破碎（功率 200w，超聲3s，間隔7s，共3min），10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.187-0.071=0.116，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.441-0.071=0.370，按細(xì)胞數(shù)量計算銅含量得：
細(xì)胞銅含量（nmol/106 cell）= 8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N=0.5016 nmol/106 cell。
2. 收集約5百萬U937細(xì)胞，加入0.4mL蒸餾水，超聲波破碎（功率 200w，超聲3s，間隔7s，共3min），10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.129-0.071=0.058，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.441-0.071=0.370，按細(xì)胞數(shù)量計算銅含量得：
細(xì)胞銅含量（nmol/106 cell）= 8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N=0.2508 nmol/106 cell。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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