尿蛋白含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（麗春紅比色法）

微量法

貨號(hào)：BC5655

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一工作液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一：蒸餾水=0.1mL：0.9mL（1mL，1T）的比例配制試劑一工作液；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：5mg/mL BSA標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取80μL 5mg/mL BSA標(biāo)準(zhǔn)液，加入920μL蒸餾水，配制成0.4 mg/mL BSA標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明：

尿液中蛋白含量增加，表明腎臟系統(tǒng)的重吸收作用減弱，通?？勺鳛槟I臟疾病臨床診斷的輔助依據(jù)。

在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅染料，離心得到的蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物可溶解于堿性溶液，檢測(cè)其在560nm處的吸光值可計(jì)算得到樣本蛋白含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、2mL EP管、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理

1. 尿液等液體樣本：直接測(cè)定。若有渾濁請(qǐng)離心后取上清置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1．可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2．操作表：

三、尿蛋白含量計(jì)算

尿蛋白含量（mg/mL）= ΔA測(cè)定×（C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V樣÷V樣= 0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.4mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.4mL。

注意事項(xiàng)：

1、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中離心步驟結(jié)束后，上清液需要全部除去，同時(shí)不可損失沉淀，否則會(huì)影響比色結(jié)果。

2、 如果?A測(cè)定小于0.006或測(cè)定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定；如果?A測(cè)定大于0.4，建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

參考文獻(xiàn)：

[1] Michael A Pesce, Carl S Strande. A new micromethod for determination of protein in cerebrospinal fluid and urine[J]. Clinical Biochemistry, 1973, 19(11): 1265-1267. 

[2] Jean Dube, Joel Girouard, Pierre Leclerc. et al. Problems with the estimation of urine protein by automated assays[J]. Clinical Biochemistry, 2005, 38(5): 479-485.

[3] Pan Ya. An analysis about the quantitative measurement of urinary protein[J]. China Health Standard Management, 2014, 5(18): 125-126. 

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