北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4920-50T/24S
更新時間：2024-03-23
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1172
010-50973130
產(chǎn)品分類
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肌酸含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4920
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
標準品：1 mg一水肌酸。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，即1 mg/mL一水肌酸標準儲備液。用不完的試劑4℃保存一個月。
產(chǎn)品說明：
肌酸(Creatine)是一種含氮化合物，自然存在于脊椎動物體內(nèi)，能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細胞提供能量。肌酸可由精*酸（arginine)、甘*酸（glycine）及甲*氨酸（methionine）三種氨基酸合成，可由人體自行合成，也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中，主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補充劑主要通過增加肌肉質(zhì)量，增強運動表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經(jīng)肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究，它可能有助于保護神經(jīng)和改善細胞生物功能狀態(tài)。
肌酸可在堿性條件下與聯(lián)乙酰-α-萘酚發(fā)生反應(yīng)，生成紅色產(chǎn)物在530 nm處有吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數(shù)量（104個）: 提取液一體積（mL）為500~1000 : 1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液一）加入提取液一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔9秒，總時間5 min）；于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
2、組織樣本的制備：按照質(zhì)量（g）: 提取液一體積(mL)為1: 5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
3、血清（漿）：取100 μL血清（漿）加入1 mL提取液一，4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 標準溶液配制：將1 mg/mL一水肌酸標準儲備液，用蒸餾水稀釋至100、80、50、25、12.5、6.25 μg/mL標準溶液待用。
3、 按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標準管 |
樣本 | 100 | 100 | - | - |
蒸餾水 | - | 100 | 100 | - |
標準溶液 | - | - | - | 100 |
試劑一 | 200 | 200 | 200 | 200 |
試劑二 | 100 | - | 100 | 100 |
室溫避光反應(yīng)10 min | ||||
蒸餾水 | 600 | 600 | 600 | 600 |
充分混勻，測定530 nm處的吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標準。ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。 | ||||
注：空白管只需做1-2次。
三、肌酸含量計算
1、 標準曲線繪制：以一水肌酸標準溶液濃度為橫坐標（x，μg/mL），以ΔA標準為縱坐標（y）繪制標準曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程求得x（μg/mL）。
2、 計算公式
（1）按照蛋白濃度計算
肌酸含量（μg/mg prot）= x×V樣÷（V樣×Cpr）×0.879=x÷Cpr×0.879
（2）按照樣本質(zhì)量計算
肌酸含量（μg/g 質(zhì)量）= x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×0.879=1.044×x÷W
（3）按照細菌或細胞數(shù)量計算
肌酸含量（μg/104 cell）= x×（V上清+V提取液二）÷（細胞數(shù)量×V上清÷V提取液一）×0.879
= 1.044×x÷細胞數(shù)量
（4）按照血清（漿）體積計算
肌酸含量（μg/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷ [V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]×0.879=11.482×x
V樣：加入樣本體積，100 μL=0.1 mL；V上清：提取液一提取時上清液體積，0.8 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；細胞或細菌數(shù)量：以104計；V提取液一：加入提取液一體積，1 mL；V提取液二：加入提取液二體積，0.15 mL；V液體：液體樣本體積，0.1 mL；0.879：換算系數(shù)，一水肌酸相對分子質(zhì)量149.15，無水肌酸相對分子質(zhì)量131.13，0.879=131.13÷149.15。
注意事項：
1、顯色完成后，請在10 min之內(nèi)完成檢測。
2、提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酸含量需要另取樣本，即取相同質(zhì)量的組織、同等數(shù)目的細菌或細胞，用1.1875mLPBS（生理鹽水）勻漿；取相同體積的血清（漿），用1.206mLPBS（生理鹽水）勻漿（相當(dāng)于提取步驟最終樣本上清液），用BCA法進行蛋白濃度測定。
3、如果測定吸光值低于或超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
4、試劑一、試劑二對人體有刺激性，請采取適當(dāng)?shù)姆雷o措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴乳膠手套操作。
實驗實例：
取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清稀釋2倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定-A對照=1.335-0.058=1.277，帶入標準曲線y=0.0118x+0.0343，計算x=105.3。按樣本質(zhì)量計算含量得：
肌酸含量（μg/g 質(zhì)量）=1.044×x÷W ×2（稀釋倍數(shù)）=2198.7 μg/g 質(zhì)量。
取100μL牛血清加入1mL提取液一，離心取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.596-0.069=0.527，帶入標準曲線y=0.0118x+0.0343，計算x=41.754。按照液體體積計算含量得：
肌酸含量（μg/mL）=11.482×x= 479.4 μg/mL。
肌酸含量檢測試劑盒 氮代謝 肌酸含量檢測試劑盒 氮代謝
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