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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產品型號：BC2320-50T/24S
更新時間：2025-08-28
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1032
010-50973130
胃*白酶活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC2320
規(guī)格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入25 mL試劑二，充分溶解；
2、 試劑三：臨用前加入25 mL蒸餾水，充分溶解。
產品說明：
胃*白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質成小肽段。一般用于神經性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃*白酶分泌的減少。
胃*白酶可催化血紅蛋白水解，水解產物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織加入1mL提取液進行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000 rpm 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至275nm，蒸餾水調零。
2、 操作表：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 100 | - |
試劑一 | 500 | 500 |
混勻，37℃保溫10min。 | ||
試劑三 | 500 | 500 |
搖勻1min。 | ||
樣本 | - | 100 |
混勻后10000rpm 4℃ 離心10min，取上清用1mL石英比色皿，測定A275nm，記為A測定和A對照，計算?A=A測定-A對照。 | ||
注意：對照管后加樣本，而測定管先加樣本
三、 胃*白酶活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按樣本質量計算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/g 質量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W
3、按液體體積計算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T=7.86×?A
Cpr：樣本蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定；W：樣本質量，g；V反總：反應總體積，1.1mL；V提：提取液體積，1mL；T：催化反應時間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4mL/μmol/cm；d：光程，1cm；V液：液體體積，0.1mL。
實驗實例：
1、 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清稀釋2倍，置冰上，按照測定步驟操作，測得計算?A=A測定-A對照=1.234-1.199=0.035，按樣本質量計算酶活得：
胃*白酶酶活（U/g 質量）=0.786 ×?A ÷ W × 2（稀釋倍數(shù)）=0.5502 U/g 質量。
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