羥*氨酸（HYP）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC0250
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：自備6 mol/L鹽酸溶液，大約需要100mL，常溫保存；試劑盒內(nèi)提供一個30mL棕色空瓶，僅做分裝使用，請自行標(biāo)注試劑名稱

2. 6 mol/L鹽酸提取液的配制：按濃鹽酸（37%）和H₂O的體積比是1：1進(jìn)行配制。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：0.5 mg/mL羥*氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。

產(chǎn)品說明：
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標(biāo)。
樣本經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲***甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣本水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。
技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.051 μg/mL
線性范圍：0.117-15 μg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

“具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項：

1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

2. 試劑有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。

3. 按樣本蛋白濃度計算時，需單獨提取樣本中的蛋白質(zhì)并測定。

實驗實例：
取0.2g小鼠皮膚進(jìn)行樣本處理，取上清后蒸餾水稀釋32倍后按測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.548-0.124=0.424，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計算x=6.62，按樣本質(zhì)量計算含量得：
組織羥*氨酸含量（µg/g 質(zhì)量）=4x÷W×32（稀釋倍數(shù)）=4×6.62÷0.2×32=4236.8 µg/g 質(zhì)量。
取8×10⁶個HMC-1細(xì)胞進(jìn)行樣本處理，取上清后按測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.245-0.124=0.121，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計算x=1.84，按細(xì)胞數(shù)量計算含量得：
細(xì)胞羥*氨酸含量（µg/10⁶ cell）=2x÷N=2×1.84÷8=0.46 µg/10⁶ cell。
取300μL牛血清進(jìn)行樣本處理，取上清后按測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.243-0.124=0.119，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計算x=1.81，按液體體積計算含量得：
液體羥*氨酸含量（µg/mL）=6.67×x=6.67×1.81=12.07 µg/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Litong Fan,Jiaqing Chen,Yanmeng Tao,et al. Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin. Journal of Orthopaedic Research. January 2019;(IF3.043).

2. Qu P, Rom O, Li K, Jia L, Gao X, Liu Z, Ding S, Zhao M, Wang H, Chen S, Xiong X, Zhao Y, Xue C, Zhao Y, Chu C, Wen B, Finney AC, Zheng Z, Cao W, Zhao J, Bai L, Zhao S, Sun D, Zeng R, Lin J, Liu W, Zheng L, Zhang J, Liu E, Chen YE. DT-109 ameliorates nonalcoholic steatohepatitis in nonhuman primates. Cell Metab. 2023 May 2;35(5):742-757.e10. doi: 10.1016/j.cmet.2023.03.013. Epub 2023 Apr 10. PMID: 37040763.

3. Hao Y, Zhou J, Tan J, Xiang F, Qin Z, Yao J, Li G, Yang M, Zeng L, Zeng W, Zhu C. Preclinical evaluation of the safety and effectiveness of a new bioartificial cornea. Bioact Mater. 2023 Aug 8;29:265-278. doi: 10.1016/j.bioactmat.2023.07.005. PMID: 37600931; PMCID: PMC10432718.

參考文獻(xiàn)：

1. Naeini A, Miri R, Shafiei N. et al. Effects of topical application of Calendula officinalis gel on collagen and hydroxyproline content of skin in rats[J]. Comparative Clinical Pathology, 2012, 21: 253-257.

2. Ignat’eva N, Danilov N, Averkiev S. et al. Determination of hydroxyproline in tissues and the evaluation of the collagen content of the tissues[J]. Journal of Analytical Chemistry, 2007, 62: 51-57.

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