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限制性內(nèi)切酶酶切具體操作注意事項(xiàng)

1.大多數(shù)限制酶貯存在50%甘油溶液中,以避免在-20℃條件下結(jié)冰。當(dāng)終反應(yīng)液中甘油濃度大于12%時(shí),某些限制酶的識(shí)別特異性降低,從而產(chǎn)生星活性,更高濃度的甘油會(huì)抑制酶活性。因此加入反應(yīng)的酶體積不超過反應(yīng)總體積的1/10,避免限制酶活性受到甘油的影響。2.濃縮的限制酶可在使用前用1×限制酶緩沖液稀釋,但切勿用水稀釋以免酶失活,用水稀釋的酶不能長期保存。3.反應(yīng)體系中Mg2+是限制酶僅有的共同因子,當(dāng)用其它二價(jià)陽離子代替Mg2+或加入能螯合Mg2+的EGTA或EDTA時(shí),酶活性...

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前體T細(xì)胞陽性選擇的分子機(jī)制新發(fā)現(xiàn)

胸腺細(xì)胞又名前體T細(xì)胞，在胸腺中經(jīng)歷受體基因重排和陽性選擇等重要的生物學(xué)過程，分化成熟為有功能的T細(xì)胞，然后遷移到外周淋巴器官行使其免疫功能。絲氨酸/蘇氨酸激酶LKB1在調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝平衡、調(diào)控胚胎血管生成、維持個(gè)體發(fā)育和抑制癌癥發(fā)生等方面有著很重要的作用。過去研究組發(fā)現(xiàn)LKB1通過激活細(xì)胞能量感受器AMPK和上調(diào)抗凋亡因子Bcl-XL的表達(dá)，調(diào)控胸腺細(xì)胞存活。新研究發(fā)現(xiàn)，LKB1還調(diào)控胸腺細(xì)胞的陽性選擇。在免疫T細(xì)胞特異的LKB1敲除小鼠中，胸腺細(xì)胞不能夠分化成熟為T細(xì)胞...

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非特異性羧酸酯酶在昆蟲抗藥性中的作用機(jī)制

研究人員利用體外定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)七種重要農(nóng)作物害蟲棉蚜、褐飛虱、赤擬谷盜、斜紋夜蛾，異色瓢蟲、家蠶、蜜蜂的非特異性羧酸酯酶基因進(jìn)行位點(diǎn)特異性突變，通過構(gòu)建融合表達(dá)載體和親合層析表達(dá)、純化酯酶蛋白，測(cè)定酯酶突變體對(duì)酯酶底物β-乙酸萘酯和有機(jī)磷殺蟲劑對(duì)氧磷、毒蟲畏的降解活性。結(jié)果表明，G/A151D和W271L突變分別顯著的降低了五種和七種昆蟲的羧酸酯酶原有的活性，分別使五種和六種昆蟲的羧酸酯酶獲得有機(jī)磷水解酶的活性，W271L突變對(duì)酶的影響力更大，證明了昆蟲通過羧酸酯酶發(fā)生點(diǎn)突...

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人類胃腸道粘膜損傷修復(fù)研究新發(fā)現(xiàn)

脊椎動(dòng)物三葉因子是一族富含半胱氨酸的小分子多肽，廣泛分布在上皮系統(tǒng)中，與粘膜保護(hù)，損傷修復(fù)和腫瘤密切相關(guān)，在胃腸道粘膜的損傷修復(fù)中起到重要的作用。目前已證明人體缺少三葉因子會(huì)導(dǎo)致的胃癌發(fā)生率、腸道粘膜修復(fù)功能的喪失而造成炎癥腹瀉直危機(jī)生命。自三葉因子發(fā)現(xiàn)二十多年來，揭示其分子作用機(jī)制，尤其是鑒定介導(dǎo)其生物學(xué)功能的細(xì)胞膜受體是相關(guān)領(lǐng)域科學(xué)家致力解決的關(guān)鍵問題。此次，課題組利用兩棲類三葉因子生物活性高和可激活血小板的特點(diǎn)，采用藥理學(xué)，分子細(xì)胞生物學(xué)和受體缺失型研究技術(shù)和手段發(fā)現(xiàn)了...

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人體代謝廢物致癌之謎

過去人類基因組學(xué)的研究表明，人體內(nèi)代謝酶異檸檬酸脫氫酶“突變”與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，但科學(xué)家們對(duì)導(dǎo)致該腫瘤發(fā)生及惡變的詳細(xì)機(jī)制并不清楚。近科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了名為“２ＨＧ”的代謝物誘發(fā)神經(jīng)膠質(zhì)瘤和白血病的作用機(jī)制。這一突破不僅揭示了人體代謝物的致癌之謎，也為神經(jīng)膠質(zhì)瘤等腫瘤的藥物治療提供了新的方向。他們先探明了“異檸檬酸脫氫酶突變致癌”的可能機(jī)制，并進(jìn)一步提出由于“異檸檬酸脫氫酶”影響了人體細(xì)胞內(nèi)的活性，進(jìn)而致癌的新概念。通過進(jìn)一步研究證實(shí)，異檸檬酸脫氫酶突變后，在人體...

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阿爾茨海默病的研究新進(jìn)展

阿爾茨海默病所謂的老年癡呆癥。是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙?？蒲腥藛T將他們各自的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行了綜合對(duì)比和分析，所涉及的被調(diào)查對(duì)象共達(dá)5.4萬人?？蒲腥藛T發(fā)現(xiàn)了與阿爾茨海默氏癥相關(guān)的4個(gè)新基因，這些基因的名字分別為MS4A、CD2AP、CD33和EPHA1。所以目前已知的與阿爾茨海默氏癥相關(guān)的基因總數(shù)已達(dá)到10個(gè)。阿爾茨海默病的治療包括：神經(jīng)保護(hù)療法、膽堿酯酶抑制劑、采用非藥物干...

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日本用于“自體干細(xì)胞移植”挽救生命

由于日本核輻射嚴(yán)重，為了考慮還有不少人還依然堅(jiān)守著被毀的核電站中，日本當(dāng)局正在考慮從福島*核電站工人體內(nèi)抽取骨髓，以獲得干細(xì)胞。一旦工人因受輻射影響傷到骨髓，便可注入保存下來的自體健康干細(xì)胞，從而挽救勇士們的生命。這種“自體干細(xì)胞移植”法已被廣泛用于拯救因高劑量的放化療而摧毀骨髓的癌癥患者，同時(shí)還用于治療那些會(huì)破壞骨髓的疾病，例如白血病、多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤等?！缎l(wèi)報(bào)》稱，作為一項(xiàng)預(yù)防措施，該計(jì)劃將有助于挽救奮不顧身戰(zhàn)斗在核反應(yīng)堆一線的工程師和注水工人。先，工人們會(huì)被注入血液...

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血小板的研究取得新進(jìn)展

近日，來自中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室張?jiān)普n題組在血小板凋亡研究中取得了新進(jìn)展。血小板的主要生理功能是參與止血及血栓形成，并在動(dòng)脈粥樣硬化，腫瘤轉(zhuǎn)移和炎癥反應(yīng)等過程中起著重要的作用。體內(nèi)是否存在獨(dú)立于血小板激動(dòng)劑的血小板凋亡誘導(dǎo)因子，血小板體內(nèi)清除的機(jī)制是目前有待解決的重要問題。隨著基因組學(xué)的發(fā)展，大量測(cè)序結(jié)果顯示除眼睛以外，betagamma-晶狀體蛋白廣泛表達(dá)于呼吸道、胃腸道和生殖道等上皮組織中，但對(duì)它們的功能和分子作用機(jī)制目前未知。脊椎動(dòng)物三...

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