酮體含量檢測試劑盒（血清、血漿、尿液等）說明書

微量法

貨號：BC5065

規(guī)格：100T/96S

產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二A液：臨用前取一支加入600μL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復凍融。

2、 試劑二B液：臨用前取一支加入300μL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復凍融。

3、 試劑三：臨用前取一支加入400μL蒸餾水（100T/96S），充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存3周。避免反復凍融。

4、 標準品1：8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入0.98mL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標準溶液，2-8℃可以保存4周。臨用前根據試驗所需量用蒸餾水稀釋成0.2mg/mL標準溶液待用，即為標準溶液1。

5、 標準品2：8mg乙酰乙酸鋰。臨用前加入0.95mL蒸餾水，充分溶解，即8mg/mL乙酰乙酸鋰標準溶液，-20℃可以保存4周。臨用前根據試驗所需量用蒸餾水稀釋成0.05mg/mL標準溶液待用，即標準溶液2。

6、 BOH工作液配制：臨用前根據試驗所需量將試劑一A液、試劑二A液 、試劑三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，5T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現用現配，工作液在4h內用完。

7、 AcAc工作液配制：臨用前根據試驗所需量將試劑一B液、試劑二B液、試劑三按照870μL:20μL:10μL（共900μL，5T的量）的比例配成工作液，充分混勻，置于37℃保溫15min（此步驟不可省略），現用現配，工作液在4h內用完。

產品說明：

酮體是肝臟脂肪酸氧化分解的中間產物乙酰乙酸（AcAc）、β-羥丁酸（BOH）及丙酮三者統(tǒng)稱。酮體中丙酮的生成量相當小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和β-羥丁酸則經血流進入肝外組織，在那里被氧化，經檸檬酸循環(huán)提供更多能量給那些組織使用，例如骨、心肌和腎皮質。

在pH 7.0和37℃條件下，BOH在β-羥丁酸脫氫酶（HBDH）催化下脫氫生成乙酞乙酸，同時NAD⁺被還原成NADH；在pH 8.8和37℃條件下，AcAc被HBDH還原為3-羥基丁酸酯或脫羧生成丙酮，同時NADH被氧化成NAD⁺，NADH在340nm波長下有特征吸收峰，通過檢測在340nm波長下的吸光值變化可以計算出BOH和AcAc的含量，從而計算出樣本中酮體的含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/培養(yǎng)箱、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

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