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當前位置:首頁產品中心生化檢測試劑盒-常量法BC1410-50T/48S超氧陰離子清除能力檢測試劑盒 常量法

超氧陰離子清除能力檢測試劑盒 常量法
產品簡介:

超氧陰離子清除能力檢測試劑盒 常量法
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Superoxide Anion Scavenging Capacity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產品型號:BC1410-50T/48S

更新時間:2024-07-09

廠商性質:生產廠家

訪 問 量 :2963

服務熱線

010-50973130

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產品介紹

超氧陰離子清除能力檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號:BC1410

規(guī)格:50T/48S

產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體60 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑一

液體3mL×1瓶

2-8℃保存

試劑二

粉劑×2瓶

2-8℃保存

試劑三

液體15 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑四

液體15 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑五

液體15 mL×1瓶

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:臨用前每瓶加6mL 蒸餾水充分溶解。2-8℃保存4周。

產品說明:

生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞 作用,導致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。

AP-TEMED系統(tǒng)產生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-與對氨基 苯磺酰胺和α-萘 胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm 處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關。注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1、組織:按照組織質量(g)︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000 g,4℃,離心10 min,取上清,置于冰上待測。

2、液體:直接檢測。若有渾濁則離心后取上清待測。

3、細胞樣本:收集細胞到離心管內,棄上清,按照每500萬細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細胞(功率200w,超聲3s,間隔10s,重復30次),然后10000g,4℃,離心10min,取上清,置冰上待測。

二、測定步驟

1、 分光光度計預熱30 min以上,調節(jié)波長至530 nm,蒸餾水調零。

2、 操作表(1.5mLEP管):

 

試劑名稱(µL)

空白管

測定管

試劑一

50

50

試劑二

200

200

充分混勻, 25℃反應 1min

水

125

-

樣品

-

125

試劑三

250

250

充分混勻,37℃反應 30min

試劑四

250

250

試劑五

250

250

充分混勻, 37℃顯色 20min,吸取1mL 于1mL玻璃比色皿里,在 530nm 處測定空白管和測定管的吸光值,分別記為A空白,A測定。空白管只需做1-2次。

三、超氧陰離子清除能力計算

超氧陰離子清除率(%)=(A空白-A測定)÷A空白×100%

注意事項:

1、樣本制備好之后,立刻進行測定,請勿將樣本進行長時間的低溫保存,以免影響測定結果。

實驗實例:

1、 稱取0.1 g黃楊葉片組織,加入1 mL提取液,冰浴勻漿,10000 g,4℃條件下離心10 min;取上清置于冰上待測。使用1 mL玻璃比色皿,按照測定步驟操作,計算A空白=0.666,A測定=0.157,按公式計算超氧陰離子清除率=(0.666-0.157)÷0.666×100%=76.4%

2、 吸取125μl的羊血清,使用1 mL玻璃比色皿,按照測定步驟操作,計算A空白=0.666,A測定=0.193,按公式計算活性超氧陰離子清除率=(0.666-0.185)÷0.666×100%=72.22%

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